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透射電鏡測(cè)試之負(fù)染色制樣技術(shù)詳解
來(lái)源: 時(shí)間:2024-09-26 09:48:50 瀏覽:3893次

透射電鏡測(cè)試之負(fù)染色制樣技術(shù)詳解

 

透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscopy, TEM是一種高分辨率的顯微鏡,能夠觀察到樣品的納米級(jí)結(jié)構(gòu);負(fù)染色制樣技術(shù)是一種在TEM觀察中常用的樣品制備方法,特別適用于病毒、蛋白質(zhì)、納米顆粒等微小生物樣品的觀察。

一、原理

負(fù)染色技術(shù)是一種利用重金屬鹽溶液對(duì)樣品進(jìn)行染色,使背景電子密度增加,而樣品本身保持低電子密度,從而在TEM圖像中形成負(fù)反差效果的方法;這種技術(shù)能夠提高樣品與背景之間的對(duì)比度,使樣品的結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)更加清晰。

二、操作步驟

1. 樣品準(zhǔn)備:首先,需要將待觀察的樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?,以便于?/span>TEM網(wǎng)格上形成單層或低密度分布的樣品。

2. 網(wǎng)格準(zhǔn)備:選擇合適的TEM網(wǎng)格,通常為碳支持膜網(wǎng)格;將網(wǎng)格放在TEM專用濾紙上,用移液槍吸取少量樣品滴在網(wǎng)格上。

3. 滴加染色劑:在網(wǎng)格上滴加適量的重金屬鹽溶液作為染色劑;常用的染色劑有磷鎢酸(PTA)、醋酸鈾等。

4. 吸附和干燥:讓染色劑在網(wǎng)格上吸附一段時(shí)間,然后用濾紙吸去多余的染色劑,使樣品干燥。

5.TEM觀察:將制備好的負(fù)染色樣品放入透射電子顯微鏡中,調(diào)整適當(dāng)?shù)募铀匐妷汉头糯蟊稊?shù),進(jìn)行觀察。

三、注意事項(xiàng)

1. 樣品濃度:樣品的濃度需要適中,過(guò)高的濃度會(huì)導(dǎo)致樣品堆積,過(guò)低的濃度則可能觀察不到樣品。

2. 染色劑選擇:不同的染色劑適用于不同類型的樣品,應(yīng)根據(jù)樣品的特性選擇合適的染色劑。

3. 染色時(shí)間:染色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),以免染色劑過(guò)度滲透樣品,導(dǎo)致樣品結(jié)構(gòu)變形或破壞。

4. 干燥過(guò)程:干燥過(guò)程應(yīng)避免樣品的污染和破壞,操作要輕柔,避免振動(dòng)。

四、應(yīng)用

1. 病毒觀察:負(fù)染色技術(shù)是觀察病毒顆粒的常用方法,可以清晰地顯示病毒的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

2. 蛋白質(zhì)分析:負(fù)染色技術(shù)可以用于觀察蛋白質(zhì)晶體和蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)構(gòu)。

3. 納米顆粒:對(duì)于納米材料的研究,負(fù)染色技術(shù)能夠提供顆粒的形態(tài)和分布信息。

4. 細(xì)胞組分:負(fù)染色技術(shù)可以用于觀察細(xì)胞器的結(jié)構(gòu),如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等。

五、結(jié)論

負(fù)染色制樣技術(shù)是一種簡(jiǎn)單、有效的TEM樣品制備方法,它通過(guò)增加背景電子密度,使樣品在TEM圖像中呈現(xiàn)出負(fù)反差效果,從而提高了樣品的可見(jiàn)性和對(duì)比度,這種技術(shù)對(duì)于觀察微小生物樣品和納米材料具有重要作用;然而,負(fù)染色技術(shù)也有其局限性,如染色劑可能對(duì)某些樣品造成破壞,染色效果受多種因素影響,因此,在實(shí)際操作中,需要根據(jù)樣品的特點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,?yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,以獲得最佳的觀察效果;隨著透射電鏡技術(shù)的發(fā)展,負(fù)染色制樣技術(shù)也將不斷完善,為科學(xué)研究提供更強(qiáng)大的支持。

 

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