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不同生物樣品在進行TEM測試前應該如何取材送樣？

來源：測試GO 時間：2022-11-08 09:58:12 瀏覽：2129次

生物樣本透射電鏡（TEM）適用于生物樣品（細胞，生物組織）材料內(nèi)部形貌的分析和研究。在進行實驗之前，取材和送樣是至關重要的，如果處理不當則會直接影響實驗結果。本文向大家介紹，在我們進行生物樣本透射電鏡測試前動物普通組織以及培養(yǎng)細胞的取材、送樣。

生物樣本透射電鏡測試案例圖

動物普通組織取材、送樣：

取材原則：切薄并盡快投入固定液；注意下述要求。

1. 請盡快固定。動物組織最好在離體后1 min內(nèi)開始固定。

2. 非灌注的組織，厚度不超過4 mm，請用恰當方式（比如切寬薄片）體現(xiàn)位置和層次關系。盡量不要事先切成很小的顆粒。

3. 請用鋒利薄刀片切組織，朝一個方向劃，不要來回切割，不要擠壓、拉扯。

4. 含有食物殘渣（如消化道）、大量血液（如心?。┗蚱渌じ轿铮ㄈ缛橄俚龋┑慕M織，請用生理鹽水快速漂洗，再投入固定液。

5. 請保證固定液量充足。固定液和組織的體積比不小于20 : 1。

6. 最初的30 min以后，最好在4 ℃的固定液中浸泡，嚴禁結冰（太靠近冰箱后壁或冰袋運輸都可能使組織結冰。冬季寧可常溫送樣）。

備注：

（1）組織尺寸和容器關系（只裝一個的參考標準）：

芝麻到綠豆大?。ㄈ缧∈竽I上腺）：請用1.5 ml EP管；

黃豆大?。ㄐ∈竽I臟）：請用5 ml離心管；

鋪展面積類似蠶豆大小的組織片：請用平底的25 ml廣口瓶；

（2）每個容器含有N個組織時：容器體積要適當增大，組織不要相互擠壓變形。

培養(yǎng)細胞常規(guī)簡易取材、送樣：

1. 最好刮取細胞，收集在離心管中，1500 rpm離心5 ~ 10 min（該參數(shù)可按自己的經(jīng)驗調(diào)整，目的是不損傷細胞結構的情況下去掉培養(yǎng)液成分）。

2. 棄上清，加入固定液重懸細胞。

3. 細胞懸液盡快（1分鐘內(nèi)，久了離心難以緊固）轉移至1.5 ml尖底EP管，立即以10000 r/min離心12 min（該參數(shù)適用于一般小型臺式離心機，不可隨意更改，務必使細胞離緊不散）；離緊后的細胞約半顆綠豆大小，切不可太大。

4. 靜置15 min，然后小心棄上清，再沿管壁緩慢加入室溫或4 ℃固定液（不可沖擊、吹散細胞）。

5. 在4 ℃保存或運輸。嚴禁結冰（太靠近冰箱后壁或冰袋運輸都可能使組織結冰。冬季寧可常溫送樣）。

備注：

（1）對細胞表面結構沒有特殊觀察要求的動物細胞，均可按本法操作，比如精子、血液、脫落細胞等。薄壁細菌也可按本法處理。

（2）觀察細胞連接的實驗，嚴禁用消化的方法收集細胞。

（3）不耐受高速離心的樣品，請以懸液送樣。盡可能裝滿，以減少運輸途中的震蕩。

（4）厚壁真菌等離心緊固后不易滲透的樣品，也請以懸液送樣，要求同上。

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