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SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳用途分析以及測(cè)試中常見(jiàn)問(wèn)題

來(lái)源：測(cè)試GO 時(shí)間：2022-11-03 10:20:43 瀏覽：4157次

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單，所以具有廣泛的用途。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳是許多研究領(lǐng)域的重要的分析技術(shù)。

cas12a蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳和蛋白質(zhì)免疫印記結(jié)果

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳用途：

1.蛋白質(zhì)純度分析；

2.蛋白質(zhì)分析量的測(cè)定，根據(jù)遷移率大小測(cè)定蛋白質(zhì)亞基的分子量；

3.蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定；

4.蛋白質(zhì)水解的分析；

5. 免疫沉淀蛋白的鑒定；

6.免疫印跡的第一步；

7.蛋白質(zhì)修飾的鑒定；

8.分離和濃縮用于產(chǎn)生抗體的抗原；

9.分離放射性標(biāo)記的蛋白質(zhì)；

10.顯示小分子多肽。

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳有效分離范圍取決于聚丙烯酰胺的濃度和交聯(lián)度，其孔徑隨著雙丙烯酰胺與丙烯酰胺比率的增加而減小，比率接近于1：20時(shí)，孔徑達(dá)到最小值。分子量低于10kD的小分子肽類，即使用較高濃度的聚丙烯酰胺凝膠的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳也不能完全分離，或是顯不出色，或是顯帶較弱，帶型彌散。且分子量越小，效果也越差。

為了能在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳上顯示測(cè)定小分子量的多肽，通常采取兩種方法：一是增加凝膠的濃度和交聯(lián)度，在制膠時(shí)加入一些可以降低聚丙烯酰胺凝膠網(wǎng)限孔徑的溶質(zhì)分子，使用尿素、甘油或蔗糖等物質(zhì)；二是選擇緩沖液中的拖尾離子的種類和濃度以達(dá)到改善多肽的分離效果

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)試的常見(jiàn)問(wèn)題：

Q1、如何讀取SDS-PAGE結(jié)果

電泳后肉眼無(wú)法觀察到蛋白分離，需要后續(xù)的染色技術(shù)。考馬斯亮藍(lán)染色和銀染是常規(guī)檢測(cè)和定量電泳分離蛋白質(zhì)的常用方法。經(jīng)過(guò)固定-染色-脫色等簡(jiǎn)單處理后，可以清楚的觀察到蛋白質(zhì)的分布。

Q2、如何儲(chǔ)存SDS-PAGE凝膠

通常在每次實(shí)驗(yàn)之前準(zhǔn)備新鮮的SDS-PAGE凝膠。然而凝膠也可以在4℃的清水的儲(chǔ)存約一周。如果凝膠染色后不能及時(shí)拍照，則需要將其放入水中，以防止凝膠干燥和收縮。建議盡快拍攝染色結(jié)果，如果凝膠長(zhǎng)時(shí)間浸泡在水中，條帶會(huì)散開(kāi)。

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