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TEM測(cè)試如何低速離心取材以及送樣方法？

來(lái)源：測(cè)試GO 時(shí)間：2022-09-16 14:51:47 瀏覽：1611次

在我們進(jìn)行TEM測(cè)試時(shí)，低速離心取材以及送樣是實(shí)驗(yàn)的重要的一部分，下面教大家一個(gè)所有類型均適用的細(xì)胞樣品操作方法：

動(dòng)物組織的TEM圖

1. 最好刮取細(xì)胞，收集在離心管中，1500 rpm離心5 ~ 10 min（初次離心參數(shù)可按自己的經(jīng)驗(yàn)調(diào)整，目的是不損傷細(xì)胞結(jié)構(gòu)的情況下去掉培養(yǎng)液成分）。

2. 棄上清，加入常溫（平時(shí)固定液4℃保存，臨用前拿出復(fù)溫到室溫或體溫）的3%戊二醛固定液，重懸細(xì)胞。常溫固定2 min。

3. 轉(zhuǎn)移至1.5 ml尖底EP管，2000 rpm離心10 min。此步離心后，細(xì)胞應(yīng)為約半顆綠豆大小。

4. 用吸管小心棄上清，加入室溫的0.1M PB或等滲PBS，重懸細(xì)胞。再以1000 rpm離心5 ~10 min。

5. 以相同條件重復(fù)上述重懸、離心步驟，再次漂洗細(xì)胞（不要偷懶，要洗第二遍）。

6. 用吸管小心棄上清，加入預(yù)熱到40℃的GT2(實(shí)驗(yàn)室提供的特殊固定液)專用溶液重懸細(xì)胞（輕輕搖勻或吹吸均可，不要有肉眼可見的大塊）；立即以3000 rpm離心10 min。

7. 用吸管盡快小心棄上清；然后密閉管蓋，轉(zhuǎn)入4℃靜置10 min（嚴(yán)禁結(jié)冰）。

8. 沿管壁緩慢加入固定液，不要沖擊細(xì)胞團(tuán)，靜置30 min后可送樣。

重點(diǎn)：

（1）固定和各項(xiàng)操作都是室溫條件，GT2(實(shí)驗(yàn)室提供的特殊固定液)本身要預(yù)熱到40℃，GT2凝結(jié)前沒有需要預(yù)冷的步驟。

（2）取材完成后，在4℃保存，保存和運(yùn)輸期間嚴(yán)禁結(jié)冰（太靠近冰箱后壁或冰袋運(yùn)輸都可能使樣品結(jié)冰。冬季寧可常溫送樣）。

（3）觀察細(xì)胞連接的實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用消化的方法收集細(xì)胞。

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